細(xì)菌原位雜交：培養(yǎng)細(xì)菌和組織標(biāo)本
培養(yǎng)后的細(xì)菌原位雜交：
（1） 細(xì)菌FISH探針的濃度為25-60μg/ml，即大約5-25μM濃度，雜交液稀釋20-50倍。
（2） 將菌株震蕩混合10秒，用鉆石筆在玻璃上畫圈，利用移液槍滴加50μL的細(xì)菌，并將載玻片置于37℃或室溫干燥后1-24小時。
（3） 利用梯度乙醇濃度(50%，85%和95%)脫水，每次3分鐘。在100%乙醇中脫水后，將載玻片風(fēng)干，約1-60分鐘。
（4） 雜交液稀釋細(xì)菌探針（1:50）。取50μL探針溶液加在玻片上，加玻片，多出溶液用紙巾擦拭。放入孵育盒，然后蓋好密封蓋，避光48°C中雜交5小時或37℃過夜。
（5） 配置洗滌緩沖液(700mM NaCl 72 mL, 17mM Tris/HCl，0.1% SDS)，在46°C或37℃的水浴中浸泡30分鐘。
（6） 再利用純水浸泡10分鐘，去除多余的鹽分。每片加50μL 抗熒光淬滅劑DAPI，室溫避光靜置20分鐘。熒光顯微鏡下，觀察結(jié)果，拍照。
新鮮組織的細(xì)菌原位雜交：
（1） 取材新鮮活體組織，使用卡氏固定液，固定3-12小時。石蠟包埋，切片5-8μM。
（2） 二甲苯中浸泡2次，10分鐘每次，在梯度乙醇50%，80%和95%中，按順序脫水，每次3分鐘，晾干標(biāo)本，約1-2小時。
（3） 將雜交液與探針按照25:1稀釋細(xì)菌探針。取50μL探針溶液加在玻片上，加玻片，紙巾擦拭干凈。放入保濕孵育盒，封蓋，避光48°C中雜交5小時，或37℃過夜。
備注：如果是陳舊標(biāo)本需要使用細(xì)菌原位雜交試劑進(jìn)行處理，如需要，請聯(lián)系我們。
（4） 洗滌緩沖液(700mM NaCl 72 mL, 17mM Tris/HCl，0.1% SDS)，在46°C或37℃的水浴中浸泡30分鐘。
（5） 再利用純水浸泡10分鐘，去除多余的鹽分。每片加50μL 抗熒光淬滅劑DAPI，室溫避光靜置20分鐘。觀察結(jié)果。
（6） 在40倍或60倍或100倍熒光顯微鏡下觀察，拍照。
如果遇到更多問題，請聯(lián)系我們。我們提供探針、試劑盒、耗材、設(shè)備等等。
聯(lián)系電話：020-89895006 180 1199 7127(24小時值班電話) E mail：focobio@126.com
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