堿性磷酸酶檢測試劑盒（Alkaline Phosphatase Assay Kit）

貨號：AP-T02  規(guī)格：100T    價格：310元

保存條件：4℃運輸，-20℃保存，1年，避光。

研究背景：在科研實驗或臨床標本檢測中，常需檢測堿性磷酸酶的含量，如細胞上清、組織裂解、肺泡盥洗液、血清、血漿、分泌物、尿液，唾液等。堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，又稱AP，標準的酶學稱堿性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)。該酶在堿性條件下，催化水解磷酸酯鍵。一般真核或哺乳動物的肝臟、腎臟、骨組織、胎盤中的堿性磷酸酶含量較多，該酶高溫容易失活，該酶的具體分類多。一般來說，所有干細胞的堿性磷酸酶的活性高，可以認為干細胞誘導的成功的標志。其次在腫瘤研究中，結腸癌、肝癌細胞中堿性磷酸酶的活性也會升高，人群中，兒童、部分腫瘤患者、孕婦、血清中的堿性磷酸酶活性較普通人高一些。

檢測原理：pNPP是一種常用的磷酸酶顯色底物，在堿性條件下，生成底物呈黃色，可以在400-415nm檢測吸光度。產物黃色越深，堿性磷酸酶檢活性與熒光數(shù)值呈線性關系，正相關。通過比色或熒光分析可計算堿性磷酸酶活性多少。

試劑盒組成：

A01：pNPP顯色液；2支， A02：DEA緩沖液 15ml； A03：2N NaOH終止液：15ml

A04：p-nitropheno標準品（10mM）：0.1ml。

使用說明：
1.準備顯色底物溶液：底物溶于2.5 ml檢測緩沖液（50T），混勻，4℃放置。

2.標準品工作液：10μl pNPP溶液，加入檢測緩沖液稀釋至190ul，濃度為0.5mM。3.樣品準備：細胞或組織裂解液的準備：勻漿或者破碎組織，細胞直接裂解，用實驗室常用細胞裂解液或者購買我公司蛋白裂解液，樣品不要反復凍融。血漿、分泌物、血清和尿液的準備：直接加樣。樣品稀釋：如樣品中含較高的堿性磷酸酶，用PBS或檢測緩沖液等進行稀釋。

4.設置空白對照孔、標準品孔和樣品孔。標準品的用量分別為4、8、16、32ul，樣品通�？梢灾苯蛹�25-100ul。利用96孔板或0.2ml離心管，如下表配制：混合：配制上述體積后，利用搖床或手動輕輕混勻。

5.孵育：在37℃條件下孵育10-30分鐘。
6.終止反應：加入100μl反應終止液終止反應，此時呈現(xiàn)不同黃色。
7.在400-420nm范圍內檢測吸光度。也可以用熒光檢測，最長放置4小時有效。
8.計算結果：酶的活性背景：AP活性單位定義：二乙醇胺(DEA)是應用酶底物檢測堿性磷酸酶的首選緩沖液。DEA緩沖液具有良好的反應動力學和更大的靈敏度。在該緩沖液25℃條件下，每分鐘水解pNPP顯色底物產生1微摩爾p-nitrophenol所需的堿性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位，稱一個DEA酶活力單位，計算出樣品中的堿性磷酸酶活性。

實驗須知：酶反應時間與孵育時間相關，一般孵育30分鐘，如樣品中酶活性較高，預稀釋樣品。EDTA、鈣離子，氟離子、檸檬酸鹽，pH等對堿性磷酸酶抑制。p-nitrophenol溶液對人體有害，請小心，戴手套防護。

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