1.試劑盒反應(yīng)體系配制

反應(yīng)體系A

（1）模板DNA（質(zhì)�；�PCR產(chǎn)物）            約500-1000ng  7ul
（2）Random Primer 1500ng/ul                           4μl

（3）ddH2O                                      Total：14ul

反應(yīng)條件：95℃  20 min  變性模板； 4℃ 5min

反應(yīng)體系B

（1）10X Ramdom buffer(100mM Tri-HCl,pH7.5, 70mM MgCl_2, DTT 1mM)         2μl

(2) 5X dNTP (TAMRA－dUTP，FITC-dUTP,Cy3-dUTP,Cy5-dUTP or DIG-dUTP)      4μl

(3) Klenow 酶  （40U/ul）                                               2μl

(4)無(wú)酶H₂O                                                       補(bǔ)齊：20ul

 2.將反應(yīng)體系A加入上述反應(yīng)液B:

37℃ 2h；標(biāo)記反應(yīng)。滅活反應(yīng)65℃ 10min；冷卻冰中備用。

3.沉淀探針除去未結(jié)合的核苷酸: 

含20µl探針離心管里加10µl Cot-1 DNA（1μg/μl），1/10體積的3M NaAC, pH＝5.2,2倍體積的100% 乙醇。置于 -80℃ 15 min或者-20℃ 至少30 min。4℃， 13,000 rpm 離心20 min，完全棄掉上清。

4.懸浮探針：用4µl無(wú)菌水懸浮沉淀，加入雜交混合液16µl,備用。

備注：試劑盒貨號(hào)：SJYW-01，SJYW-02，SJYW-03，SJYW-04，SJYW-05（不同標(biāo)記dUTP）；規(guī)格20T；價(jià)格：1500元。

TAMRA－dUTP，FITC-dUTP,Cy3-dUTP,Cy5-dUTP一般用于FISH實(shí)驗(yàn)，Bio-dUTP 和DIG-dUTP 一般用于Northern等。

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