Cat: CE001 Store：-20℃ Size：100T Price：310
產(chǎn)品介紹：
堿性磷酸酶(ALP)在堿性環(huán)境中催化磷酸酯的水解,會(huì)導(dǎo)致自由基和無(wú)機(jī)磷酸鹽的形成。在哺乳動(dòng)物中，ALP酶主要存在于肝臟、骨骼和腎臟中。血清ALP水平顯著升高，稱(chēng)為高堿性磷酸酶血癥，該變化與惡性膽道梗阻、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、肝淋巴瘤和結(jié)節(jié)病相關(guān)。
本試劑盒適用于科學(xué)研究和藥物開(kāi)發(fā)。堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒可直接測(cè)定血液、尿液等其他生物樣品中的ALP活性，無(wú)需預(yù)處理。利用ALP水解對(duì)硝基苯基磷酸，生成淡黃色產(chǎn)品，在波長(zhǎng)405 nm有最大吸光度。分光光度變化的反應(yīng)速率與酶活性成正比。該測(cè)定方法檢出最低為2U/L, 線性范圍可達(dá)800 U/L，當(dāng)樣品ALP活性超過(guò)800 U/L時(shí)，用PBS稀釋樣品，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。對(duì)于ALP活性低的樣品，培養(yǎng)時(shí)間可延長(zhǎng)至4 min以上。參考值ALP活性(U/L)人血清為12.4土2，大鼠血清為190+2.0,羊血清為202.8+4.5.
產(chǎn)品適用：
本試劑盒適用于血清、血漿、唾液、骨髓等堿性磷酸酶活性的檢測(cè)。
試劑盒組分：250T
（1）檢測(cè)緩沖液(pH 10.5) 50 mL
（2）醋酸鎂 (0.2 M) 1.5 mL
（3）pNPP 底物 (1 M) 600μl
（4）校準(zhǔn)劑檸檬黃 10 mL
所需的設(shè)備：移液槍?zhuān)瑹晒鈨x或酶標(biāo)儀、透明平底96孔板、1.5 mL離心管、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、Triton-100，可以在96孔板中進(jìn)行檢測(cè)，
樣品前期處理：
（1）ALP在4℃可穩(wěn)定48小時(shí)，在20℃可穩(wěn)定2個(gè)月。
（2）EDTA,草酸鹽，氟化物和檸檬酸鹽是已知的ALP抑制劑，在樣品制備中應(yīng)避免使用。
（3）血清、血漿(不含EDTA/檸檬酸鹽，理想情況下為未溶血)和細(xì)胞培養(yǎng)基可直接測(cè)定。
（4）細(xì)胞裂解物：105細(xì)胞PBS洗滌，溶解在0.5 mL 0.2% Triton X-100，孵育20分鐘。
（5）將5~50μl樣品轉(zhuǎn)移到透明平底96孔板的適當(dāng)孔中。
工作試劑的制備：
（1）試劑：分析緩：200 uL + 醋酸鎂 (0.2 M) ：5μL + pNPP液體(1 M) 2μL；
（2）將200 μ純凈水(空白組)和200 μ Calibrator分別轉(zhuǎn)入96孔板的不同組中；
（3）移管150 ~ 195 uL工作試劑到樣品孔。樣品孔的最終反應(yīng)容積應(yīng)為200 uL；
（4）輕輕拍打盤(pán)子攪拌。
（5）立即在405nm處利用酶標(biāo)儀讀取光密度，4分鐘后在酶標(biāo)機(jī)上再次讀取。
