外顯子生物蛋白標(biāo)記試劑盒問(wèn)答(V3)
1.你們提供蛋白、抗體、熒光標(biāo)記嗎？有幾種熒光標(biāo)記方法？
答：兩種，一種是氨基偶聯(lián)方法試的劑盒，染料含有琥珀酰乙酯(SE)或四氟苯基酯部分，可與蛋白質(zhì)的伯胺有效反應(yīng)形成穩(wěn)定共軛。另外一種方法是采用快速抗體熒光標(biāo)記試劑盒。
前者需要去除氨基溶液和BSA等雜質(zhì)，時(shí)間10小時(shí)。后者不需要去除氨基溶液，時(shí)間2-4小時(shí)。規(guī)格均是5人份。但后者不適合少部分蛋白。
2.蛋白質(zhì)標(biāo)記試劑盒的熒光有哪些？
答：天藍(lán)（DEAC），熒光素，FITC，EF488，Cy3，Cy5，Cy7，Cy3.5，Cy5.5，羅丹明，德克薩斯紅等。
3.對(duì)抗體的量和分子量大小有要求嗎？
答：試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，每次反應(yīng)可標(biāo)記10ug-1mg IgG抗體和相當(dāng)數(shù)量的其他抗體
或蛋白質(zhì)，其分子量必須大于25 kDa。
4.對(duì)抗體溶液和pH值有要求嗎？
答：對(duì)pH值在4到10緩沖液抗體，均可以標(biāo)記。
5.標(biāo)記熒光的抗體，可用于哪些應(yīng)用？
答：免疫熒光，流式細(xì)胞術(shù)，Western blotting, ELISA，FISH共定位，免疫蛋白共定位。但是，有些與抗體本身有關(guān)。因此，不能確保100%有效。如果標(biāo)記失敗，按照35%費(fèi)用。
6.蛋白或抗體熒光有什么注意事項(xiàng)？
答：為得到較好標(biāo)記效率，所標(biāo)記的抗體或蛋白質(zhì)必須不含伯胺。通過(guò)透析或其他方法，我們可以協(xié)助您解決。不純的蛋白質(zhì)，例如粗血清、粗制備的抗體將不能很好地標(biāo)記。值得注意的是在低濃度疊氮化鈉或硫柳汞(≤1 mM)不會(huì)干擾反應(yīng)。所標(biāo)記蛋白或抗體IgG溶液應(yīng)該大于2 mg/mL，低于該濃度需要濃縮。其次，抗體和蛋白純化的過(guò)程不完全一樣，具體問(wèn)題具體分析或咨詢(xún)我們focobio@126.com。
7.能否提供標(biāo)記說(shuō)明書(shū)？
答：如下。
熒光標(biāo)記抗體試劑盒（001）具體步驟：
(1) 取出試劑盒內(nèi)的碳酸氫鈉溶液（1M，pH9.0），室溫備用。
(2) 如果蛋白質(zhì)濃度大于2mg /mL，則蛋白質(zhì)應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋至2毫克/毫升(如PBS或0.1 M碳酸氫鈉。
(3)在0.2-0.5 mL的2mg /mL蛋白溶液中，加入1/10體積（20-50 μL）的1 M碳酸氫鹽。
(4)取出染料加熱到室溫平衡，將蛋白質(zhì)溶液加到反應(yīng)瓶中染料。均勻混合使染料完全溶解。攪拌反應(yīng)混合物室溫下1小時(shí)。
(5)純化：取出純化柱，離心1分鐘，丟棄離心液，加入抗體，再離心1分鐘，獲得抗體。
熒光標(biāo)記抗體試劑盒（002）具體步驟：
(1)取出試劑盒內(nèi)的熒光標(biāo)記試劑管，3分鐘室溫平衡備用。
(2) 蛋白質(zhì)或抗體緩沖液要求不嚴(yán)格，甚至有甘油均可，用試劑盒提供的稀釋液試劑管稀釋至100uL，如抗體是30uL，加入稀釋液70uL。
(3)將熒光標(biāo)記試劑管，加入到2步驟康體內(nèi)，室溫1-2小時(shí)。
(4)純化：取出試劑盒純化柱，離心1分鐘，丟棄離心液，加入抗體，重復(fù)離心，獲得抗體。
如果您在標(biāo)記中或使用產(chǎn)品中，有任何疑問(wèn)，請(qǐng)聯(lián)系我們 focobio@126.com
附產(chǎn)品信息
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Cat. |
Name |
Size |
Price |
Storage |
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001.901 |
熒光標(biāo)記抗體試劑盒-001 |
10T |
950元 |
2-8℃ |
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001.092 |
熒光標(biāo)記抗體試劑盒-002 |
10T |
950元 |
2-8℃ |
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